中文简体
Právě jste spustili metodu přechodu, která minulý týden perfektně fungovala. Kalibrační standardy vypadají čistě, ale chromatogram vzorku ukazuje další pík po 23,8 minutách. Vyměníte kolonu, připravíte čerstvý pufr a zkontrolujete detektor. Vrchol je stále tam. Poté vyměníte vodu přecházející do mobilní fáze a artefakt zmizí. To je realita vysokoúčinné kapalinové chromatografie: čistota vody je pod každou separací, a když se změní, změní se s ní i metoda.
Čistota vody ovlivňuje kvalitu dat HPLC čtyřmi praktickými způsoby: základní stabilitou, tvarem píku, retenční reprodukovatelností a životností přístroje. Kontaminanty mohou být organické molekuly, rozpuštěné ionty, částice nebo mikroby. I malé množství jednoho druhu nečistoty může způsobit následky, které jsou nepřiměřené její koncentraci.
Hlavní účinky čistoty vody na HPLC
V systému HPLC je voda činidlem, nikoli pasivním pozadím. Nese pufr, rozpouští vzorek a přispívá k pozadí detektoru. Nečistoty ve vodě se tak přesouvají přímo do analytického signálu. Níže uvedená tabulka shrnuje nejčastější kontaminanty a jejich účinky.
| Kontaminant | Příklady nebo Zdroj | Účinek v HPLC |
|---|---|---|
| Rozpuštěné organické látky | Huminové látky, změkčovadla, zbytky po čištění, výpary rozpouštědel | Vrcholy duchů absorbující UV záření, posun základní linie, změny retence |
| Anorganické ionty | Sodík, chlorid, křemičitan, stopové kovy | Změny vodivosti, interference v iontové chromatografii a LC-MS, rozšíření píku související s kovy |
| Částice | Pryskyřice jemné částice, prach, sraženiny | Zablokované frity, stoupající protitlak, opotřebení těsnění čerpadla, hlučná základní linie |
| Rozpuštěné plyny | Kyslík, oxid uhličitý, dusík | Bubliny v detektoru, špičky základní linie, drift pH |
| Mikroorganismy | Bakterie a biofilmy ve skladovacích nádobách | Znečištění kolony, ucpané frity, falešné vrcholy, nestabilita metody |
Tyto účinky nejsou pouze teoretické. Mikrobiální biofilm ve vodní nádrži může uvolňovat metabolity absorbující UV záření, a jakmile se tento film vytvoří, jednoduchá výměna vody nemusí problém vyřešit, dokud nebude nádrž vyčištěna a dezinfikována.
Co vlastně znamená "HPLC-Grade" a voda typu 1
Většina analytických metod vyžaduje vodu, která splňuje specifikace typu 1. V praxi to znamená, že měrný odpor při 25 stupních Celsia je asi 18,2 megaohm-centimetrů, vodivost se blíží 0,055 mikrosiemens na centimetr a celkový organický uhlík je dostatečně nízký, aby voda nevytvářela viditelné UV nebo MS pozadí. Samotný odpor nestačí. Musíte také znát hladinu TOC, počet částic a v některých aplikacích hodnoty silikátů nebo sodíku.
Hodnota pH čištěné vody není užitečná specifikace. Ultračistá voda nemá téměř žádnou pufrační kapacitu a rychle absorbuje oxid uhličitý ze vzduchu, takže naměřené pH kolem 5,6 jednoduše odráží rozpuštěný CO2. pH, na kterém záleží, je pH pufrované mobilní fáze, kterou připravujete.
Požadavky na kvalitu vody závisí také na detektoru. UV detekce při 210 nm je zvláště citlivá na organické znečištění, protože se zde absorbuje mnoho vazeb uhlík-kyslík a uhlík-dusík. LC-MS potřebuje vodu s velmi nízkým obsahem netěkavých nečistot, aby se zabránilo potlačení iontů a tvorbě aduktů. Odpařovací detektory jsou podobně ovlivněny stálou kontaminací, protože zvyšuje signál pozadí. Voda typu 1 je proto dobrým výchozím bodem pro téměř každou HPLC aplikaci.
Balená voda v kvalitě HPLC může fungovat, ale musí se správně skladovat a manipulovat s ní. Zkontrolujte certifikát o analýze, zaznamenejte si číslo šarže a nikdy nepředpokládejte, že stará nádoba je bez biologického růstu.
Gradientní eluce zviditelní vodní nečistoty
Nečistoty ve vodě jsou nejvíce viditelné u gradientových metod. V izokratickém běhu může kontaminant absorbující UV jednoduše trochu zvýšit základní linii. V gradientu začíná vodní frakce vysoko a frakce organického rozpouštědla v průběhu času stoupá. Kontaminanty mohou být zadrženy v hlavě kolony a poté eluovány, když se organický obsah zvyšuje. To vytváří duchové vrcholy a driftující základní linii, které mohou interferovat s integrací a kvantifikací.
Proto je slepý gradient jednou z nejjednodušších kontrol kvality vody. Spusťte svůj přesný gradient bez vstřikování vzorku. Pokud se v blanku objeví píky, mobilní fáze je podezřelá.
Denní návyky, které chrání čistotu vody
Čistá voda nezůstane čistá náhodou. Následující návyky předcházejí nejčastějším problémům v HPLC praxi.
- Používejte vodu z čistícího systému s čerstvými kazetami, funkční UV lampu a pravidelnou dezinfekci.
- Zachyťte vodu do čisté nádoby s uzávěrem. Nenechávejte nádobu otevřenou, pokud systém běží.
- Neskladujte vodu několik dní. Kdykoli je to možné, připravte mobilní fázi s čerstvou vodou ve stejný den.
- Vyvarujte se přidávání čerstvé vody do částečně naplněné nádrže. Vyměňte obsah nádržky místo doplňování.
- Spusťte slepý gradient při vlnové délce použité pro analýzu a zaznamenejte výsledek.
- Zaznamenejte měrný odpor, TOC a datum odběru vody ve svých analytických záznamech.
Pro laboratoře, které používají balenou vodu, platí stejná pravidla. Zkontrolujte datum spotřeby, nádobu ihned po použití uzavřete a nepoužitou vodu z kádinky nevracejte do láhve.
Aditiva proměňují problém s vodou v problém metody
Mobilní fáze zřídka obsahují samotnou vodu. Soli pufrů, kyseliny, činidla pro iontové páry a některé specializované modifikátory se přidávají v relativně nízkých koncentracích. Pokud voda obsahuje stopy nečistot absorbujících UV záření, tyto nečistoty nemusí změnit kapacitu pufru, ale přesto se mohou objevit v signálu detektoru.
Iontové kapaliny se někdy používají jako modifikátory mobilní fáze pro zlepšení tvaru píku nebo selektivity. Když si vyberete jeden, měl by platit stejný standard čistoty. např. l-ethyl-3-methylimidazoliumtetrafluorborát je běžná iontová kapalina pro chromatografické studie. Měl by být rozpuštěn ve vodě, která již splňuje specifikace typu 1; jinak se přísada stane dalším zdrojem kontaminace. Pokud chcete porozumět separačním vlastnostem těchto sloučenin, naše přehled toho, jak si iontové kapaliny vedou v separačních procesech pokrývá praktické proměnné.
CAS:143314-16-3 -1 -Ethyl-3-methylimidazolium Tetrafluorborátové kapaliny Dodavatel Technologie Ldet je čínská zakázková CAS:143314-16-3 -1 -Ethyl-3-methylimidazolium Tetrafluoroborate Liquids dodavatelé a 1 -Ethyl-3-methylim... Zobrazit produkt → Čistota začíná u dodavatele
V Zhejiang Ldet vyrábíme iontové kapaliny a speciální chemikálie. Z výroby víme, že stopová nečistota ve výchozím materiálu může změnit následnou výkonnost. Proto před uvolněním kontrolujeme obsah vody, zbytkové halogenidy a UV záření. Stejná disciplína patří do laboratoře HPLC: vybírejte materiály, které mají zdokumentované specifikace. např. l-butyl-3-methylimidazoliumtetrafluorborát je k dispozici s údaji o čistotě, které vám umožňují posoudit, zda je kompatibilní s vaší detekční metodou.
CAS: 174501-65-6-1-Butyl-3-methylimidazolium tetrafluorborát Dodavatelé kapalin Technologie Ldet je čínská zakázková CAS: 174501-65-6-1-Butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborát Dodavatelé kapalin a 1-butyl-3-methylimid... Zobrazit produkt → Co zkontrolovat v certifikátu analýzy
- Zbytkový obsah halogenidů, protože halogenidy mohou ovlivnit iontoměničové separace a korozi.
- Obsah vody, protože voda mění účinnou koncentraci aditiva.
- UV spektrum nebo UV cutoff, takže můžete předvídat absorbanci pozadí.
- Konzistence mezi jednotlivými šaržemi, protože nová šarže by neměla tiše změnit vaši metodu.
Pokud potřebujete pomoc s přizpůsobením materiálu k metodě, můžete prodiskutujte údaje o čistotě a vlastní požadavky s naším technickým týmem .
Zacházejte s vodou jako s částí metody
Čistota vody v HPLC není jednorázové nastavení. Je to denní proměnná, která se může měnit podle ročního období, skladovací láhve a stavu čistícího systému. Použijte vodu typu 1, potvrďte TOC a měrný odpor, zacházejte s ní správně a vyberte si aditiva se sledovatelností. V metodě postavené na nanogramech analytu voda nikdy není „jen voda“.
